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配制臺式高速離心機(jī)密度梯度溶液的方法

更新時間:2017-07-03      點擊次數(shù):6634

  前兩天小編給大家講解了臺式高速離心機(jī)密度梯度離心法和梯度介質(zhì)的回收,為了讓大家對此問題認(rèn)識更全面,今天給大家科普下密度梯度溶液的配制方法。配置密度梯度溶液,一般情況下是先配制高濃度儲備液,再用緩沖液稀釋到需要的濃度,階梯梯度配制若干個不同密度的溶液,連續(xù)梯度一般配制兩種密度的溶液,其中一種是梯度的大密度,另一種是梯度的小密度。

  用各種離心機(jī)轉(zhuǎn)子在梯度介質(zhì)中分離顆粒時,使用兩種形式的梯度,即自形成梯度和預(yù)形成梯度。自形成梯度是梯度介質(zhì)在離心場作用下顆粒重新分布,形成從頂部到底部逐漸增加密度的液柱。預(yù)形成梯度是指在離心之前,用梯度形成儀或人工的方法預(yù)先制備密度梯度柱。按照梯度結(jié)構(gòu)可分為不連續(xù)梯度(即階梯度)和連續(xù)梯度兩種類型。連續(xù)梯度又有線性梯度、指數(shù)梯度、對數(shù)梯度和復(fù)合梯度。有時為了速率區(qū)帶離心分離的方便,又設(shè)計了等動力梯度,為了防止在區(qū)帶轉(zhuǎn)子中的徑向稀釋,設(shè)計了等體積梯度。配置密度梯度溶液需要注意很多事項。

  堿金屬鹽溶液在4℃下可以長期保存,但含碘的物質(zhì)應(yīng)避光保存,多元醇易受微生物污染,保存在-20℃使用時不方便。好臨時配置。有些使用冷凍離心機(jī)進(jìn)行離心需要在無菌條件下進(jìn)行,但高壓消毒對有些梯度介質(zhì)會帶來一些不利影響,如引起Percoll顆粒不穩(wěn)定,配制時可只對稀釋劑進(jìn)行消毒,碘化梯度介質(zhì)中只有Metrizamide可以進(jìn)行高壓消毒。溶解多糖是先給粉劑里加入少許水?dāng)嚢瑁怪蔀榘胪该鞯暮隣睿傧♂尩剿梵w積。如果直接把大量水或緩沖液加到多糖粉劑里,會形成大量凝塊。可用比重瓶或折射儀測定梯度溶液的密度和所有介質(zhì)的密度分布,用下述方程能快速地根據(jù)折射率計算溶液的密度:

ρ=An-B 
式中,A和B的值隨著梯度介質(zhì)和溫度的變化而不同,如用0.8% NaCl、120mmol/L Tricine-NaOH配制的等滲Iodixanol梯度中,A=3.2984,B=3.3967。

儲存液與稀釋劑間通過混合得到的溶液密度可用下式計算:

圖片1.png

式中,D為所需密度;V為儲存液的體積;d為儲存液的密度;V1為稀釋液的體積;d1為稀釋液的密度。
  經(jīng)過小編的講解,大家是否清楚了蜀科
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